培养基
高盐LB培养基
胰蛋白胨10g/L
酵母膏5g/L
氯化钠10g/L（正常的为5g/L）
（琼脂15g/L）
高盐LB配制表
| 体积 | 胰蛋白胨 | 酵母膏 | 氯化钠 | （琼脂） |
|---|---|---|---|---|
| 1000ml | 10g | 5g | 10g | 15g |
| 500ml | 5g | 2.5g | 5g | 7.5g |
| 250ml | 2.5g | 1.25g | 2.5g | 3.75g |
| 100ml | 1g | 0.5g | 1g | 1.5g |
TB 培养基
TB 培养基
因为后续需要加入TB盐，所以以900ml为单位配制
胰蛋白胨12g
酵母膏24g
甘油4ml
10xTB盐
磷酸氢二钾125g/L
磷酸二氢钾23g/L
TB配制表
| 终体积 | TB体积 | 胰蛋白胨 | 酵母膏 | 甘油 | TB盐体积 | 磷酸氢二钾 | 磷酸二氢钾 |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 900+100ml | 900ml | 12g | 24g | 4ml | 1000ml | 125g | 23g |
| 450+50ml | 450ml | 6g | 12g | 2ml | 500ml | 62.5g | 11.5g |
| 225+25ml | 225ml | 3g | 6g | 1ml | 250ml | 31.25g | 5.75g |
| 90+10ml | 90ml | 1.2g | 2.4g | 0.4ml | 100ml | 12.5g | 2.3g |
缓冲液配制
氢氧化钾/钠溶液（KOH / NaOH）
KOH相对分子质量：56.1056g/mol，
NaOH相对分子质量：39.997g/mol
| 终体积 | 浓度 | KOH | NaOH |
|---|---|---|---|
| 100ml | 5M | 28.05g | 20.00g |
| 100ml | 3M | 16.83g | 12.00g |
| 100ml | 2M | 11.22g | 8.00g |
| 50ml | 5M | 14.03g | 10.00g |
| 50ml | 3M | 8.42g | 6.00g |
| 50ml | 2M | 5.61g | 4.00g |
磷酸钾缓冲液配制
磷酸钾缓冲液配制在线工具网站
https://www.novopro.cn/tools/potassium-phosphate-buffer.html
磷酸钠缓冲液配制
磷酸钠缓冲液配制在线工具网站
https://www.novopro.cn/tools/sodium-phosphate-buffer.html
咪唑（-盐酸）缓冲液配制
默克缓冲液计算网站-选择 ‘Imidazole’
https://www.sigmaaldrich.cn/CN/zh/support/calculators-and-apps/buffer-calculator
咪唑相对分子质量为68.08g/mol
| 终体积 | 浓度 | 咪唑 | pH |
|---|---|---|---|
| 100ml | 1M | 6.81g | 6.99 |
根据需要使用盐酸调节pH，4℃避光保存。
0.05MPIPES缓冲液配制
以终体积200ml为例，首先将3.02g PIPES溶于80ml水中，使用5M KOH溶液（约2-2.5ml）调节pH到6.7（一般当不溶解的PIPES溶解时，pH为6.7）
| 终体积 | PIPES |
|---|---|
| 200ml | 3.02g |
| 100ml | 1.51g |
2x Kinase-Ligase-DPNⅠ (KLD) Buffer
| 15%PEG6000 (w/v) | Ligase Buffer | 10mM ATP | ddH2O |
|---|---|---|---|
| 15mg | 200μl | 100μl | up to 1ml |
先将15mgPEG6000溶于700μl水（水浴60℃），冷却至室温后加入Ligase Buffer和ATP，最后加水至1ml
10x KLD Mix
| T4 DNA Ligase | T4 Polynucleotide Kinase | DPNⅠ |
|---|---|---|
| 1μl | 1μl | 0.5μl |
Inoue转化缓冲液配制（终体积1000ml）
| MnCl2 (55mmol) | CaCl2(15mmol) | KCl(250mmol) | PIPES buffer |
|---|---|---|---|
| 四水合：10.9g | 1.67g | 18.7g | 200ml |
之后使用滤膜过滤除菌，放冰箱预冷过夜
蛋白表达相关试剂配制
抗生素
Kana（卡那）抗生素
配制流程：
- 取0.5g卡那霉素溶于8ml灭菌蒸馏水中
- 补水定容至10ml
- 使用0.22μm无菌滤膜过滤
- 分装至ep管中，每管1ml，储存在-20℃条件下
配制之后为50mg/ml母液，使用时调整终浓度为工作浓度50μg/ml。
常见添加体系：
| 培养基体积 | 卡那霉素母液 |
|---|---|
| 100ml | 100μl |
| 10ml | 10μl |
IPTG
IPTG相对分子质量为238.3g/mol，储液浓度一般为0.5M
配制流程：
- 称量2.383g IPTG，溶于16ml无菌蒸馏水中
- 补水定容至20ml
- 使用0.22μm无菌滤膜过滤
- 分装至ep管中，每管1ml，储存在-20℃条件下
配制之后为0.5M母液，使用时调整终浓度为工作浓度0.5mM。
常见添加体系：
| 培养基体积 | IPTG母液 |
|---|---|
| 100ml | 100μl |
| 10ml | 10μl |
δ-ALA
δ-ALA为卟啉前体，通常应用于在无法自主合成卟啉的生物（如大肠杆菌）中表达卟啉蛋白（如P450）。
δALA相对分子质量为131.13g/mol，储液浓度一般为0.5M
配制流程：
- 称量1.311g δALA，溶于16ml无菌蒸馏水中
- 补水定容至20ml
- 使用0.22μm无菌滤膜过滤
- 分装至ep管中，每管1ml，储存在-20℃条件下
配制之后为0.5M母液，使用时调整终浓度为工作浓度0.5mM。
常见添加体系：
| 培养基体积 | δALA母液 |
|---|---|
| 100ml | 100μl |
| 10ml | 10μl |
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